在光合细菌培育过程中产生绿藻的原因是多方面的。其一是空气、水中其他菌的污染。光合细菌是水圈微生物的一种,分布于水的厌气层中,在那里进行不产氧的光合作用而生育,而其他层面确会被其他生物污染。其二是光合细菌种类较多,有4个科,其中有绿色硫磺细菌(光合菌的一种)等,可使水层出现红色或绿色,绿色层看起来似绿藻类。其三,在培养基中一定的O2、CO2、H2S、光照度条件下,光合细菌与非光合细菌的共生,使光合细菌的分离和纯化比较困难。如绿色硫磺细菌它们附着在有运动性的细菌上后,其适应能力就能大大增强了。至今未能成功地把营共生生活的绿色硫磺菌与非光合细菌各自独立培养,也许这两者之间互相交换着某种必需营养源;又如红色非硫磺细菌和绿藻共存等。这都是生长在自然界水中的生物,直接或间接地参与生态循环的原因。如果培养中是红色非硫磺细菌和绿藻,一般可以进行如下纯化步骤: 1.配制的适合光合细菌生长的培养基,需于121℃中灭菌15分钟; 2.分离培养液体要经光照,利用光合细菌对氧表现出负超向性,从绿藻周围逃开,而绿藻、蓝藻参与氧循环会悬浮于分离培养液的表层; 3.纯化培养,将已灭菌含1.2%琼脂培养基(200毫升中含100毫升)置恒温箱中水浴至45℃液化后加1~2滴光合细菌,让其分散,随后加入配制的培养基,灌满试管,盖紧试管塞,慢慢振荡,使培养液中菌种充分分散,随后把试管直立,迅速冷却至培养基凝固。此操作要无菌、迅速; 4.凝固后的含菌培养基,先置于暗室中一昼夜,再开始光照培养; 5.培养1~2周后,将试管内琼脂培养基移至消毒过的容器内,然后在无菌条件下把管状琼脂培养体割开,挑出克隆菌落接种到液体培养基中。
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