母种的制备用试管制成斜面培养基,并接种原始试管种灭菌20分钟,使微生物包括芽子色全部杀死。待压力降到0度时,慢慢放出锅内气体,趁培养基没有凝固时,将试管摆成斜面。4.接种、培养通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上,置28℃、3天后将温度降至24℃继续培养,12—15天左右,菌丝长满整个试管斜面,即成母种。原种、制备母种接种到原种培养基上,进行扩大繁殖育种即为原种,原种一般采用广口瓶或袋装。配方一木屑麸皮培养基阔树木78%麸皮20%糖1%石膏粉1%水65%PH值自然配方二棉籽壳木屑混合培养基棉籽壳90%糖1%麸皮5%过磷酸钙3%石膏粉1%PH值自然2.拌料与装袋选用新鲜无霉变原料,根据生产所需的数量,计算配料总量,将麸皮、石膏粉均匀的混合在培养料里,糖和过磷酸钙溶于水解后,按上述干料量加入水,比例为1:1、3拌匀,培养料含水量60%为宜,含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。堆闷30分钟后,装瓶。用机械或人工装袋稍加压实。实,在袋口外套入塑料环,形成象瓶子一样,然后在袋口内塞松紧适宜棉塞、或用牛皮纸包扎好。原种灭菌方法有两种,高压灭菌和常压灭菌。高压灭菌又称加压蒸气灭菌,灭菌原理:在高温、高压条件下灭菌2-3小时,将芽孢在内的微生物全部杀死。常压灭菌称流通蒸气灭菌,由于灭菌设备、条件和基本因素的不同,温度变动在90-103℃之间,其热力、穿透力不强,在一定温度下维持足够时间达到灭菌目的,通常在100℃下维持8-10小时。4.接种与培养不论用接种箱或接种室接种,在接种前,需对接种箱或接种室用0、2%的来苏水或漂白粉进行消毒处理,然后将灭菌过的料瓶放入接种箱内或接种室内,用紫外线灯照射30分钟后,在无菌条件下进行接种,或在接种前用烟雾剂密闭薰蒸消毒。即烟雾剂点燃消毒时应关闭门窗。接种室消毒,一间房需点燃3盒50克规格烟雾剂;接种箱消毒每次仅用重量为40克,但又细分为20包的其中2包点燃即可。一般18×180厘米,母种试管每支可接4—6瓶原种。将接种后的菌种瓶放入发菌室培养。以培养室温度22-26℃,相对湿度为80%以下,光线为弱散射光,发菌期间应保持良好的通风条件。原种从接种到菌丝长满瓶需30—40天。栽培种制备原种进一步扩繁,即为栽培种。栽培种一般采用塑料袋制备,规格为15×33×0、05,用无棉盖体封口。一瓶原种可接50瓶栽培种。栽培种培养基配方及拌料、装袋、灭菌、接种、发菌管理与原种用塑料袋制备时一致。菌种质量鉴定菌种质量不仅与能否成功发菌有关,也关系到产量和效益,从事木耳栽培必须严把质量关。菌种的质量鉴定有两个方面的含义:一是分离培养的菌种是否是栽培所需种类。二是菌种是否为优良菌株。黑木耳菌种正常菌丝应洁白,生活力旺盛,发菌培养45天后,瓶间自上而下会出现菊花状或梅花型胶质原基,颜色明褐至黑褐色。如果瓶底积淡黄色液体,或上半部出现黄色粘液,培养基收缩,为过期老化菌种,应予淘汰。如果菌种菌丝仅发至瓶1/3-1/2处时出现淡黑色的胶状耳基,说明菌种早熟,或扩大次数太多,或由于培养室光线过强。若菌丝只长一个角落而不蔓延,可能是培养基太干、过湿或干湿不均引起。若菌丝蔓延停止不前,并有一明显抑制线,多为杂菌所致。在发菌过程中,发现杂菌应及时检出不用。
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