解决金线莲种子自然萌发成苗效率低的方法

金线莲既具有药用价值又具有极高的观赏价值，因种子缺少胚乳在自然条件下很难独立萌发成苗，再加上自然环境和人为过度挖掘导致野生金线莲濒临灭绝。

   金线莲是多年生的珍惜中草药被称为“药王”、“神药”等等，金丝莲中氨基酸的成分和含量及抗衰老活性微量元素的含量均高于国产和野生西洋参。除此之外还能作为极具观赏价值的室内观赏植物。金线莲种子因缺少胚乳在自然条件下很难独立萌发成苗，再加上近年自然环境遭受严重破坏、人工的过度挖掘、鸟、虫、蛇等为害使野生金线莲濒临灭绝。因此金线莲的人工培养技术显得尤为重要，而人工培养条件下种子萌发成苗仍然是整个培养过程的技术瓶颈之一，由于缺乏有效的诱导方法，因此现有技术中金线莲种子的萌发率较低，严重制约了金线莲培养技术的规模化应用。

   1、内生真菌的获得

   将野生金线莲的根采下用自来水洗净泥沙，肥皂水浸泡10-20min再冲洗干净，75%酒精表面消毒30s、0.1%升汞消毒5min，最后无菌水冲洗5遍。将每条根剪成若干0.5-1.0cm的根段，平放在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA平板培养基，事先灭菌分装在无菌的培养皿中)上，每个培养皿接5个根段。对照组为最后一次的清洗液涂在培养皿中，接种40个培养皿，封口膜封好放于28℃恒温培养箱中进行暗培养。待菌长出后通过划线的方法进行纯化。在超净工作台上用接种针轻轻挑起少许菌丝，在PDA平板培养基上划斜线，随后用封口膜封好培养皿。观察菌产生的菌落形态合并相同形态的菌，将分离出的纯菌继续用PDA平板培养基培养，纯菌接种于试管中于-20℃冰箱中保存。待金线莲种子成熟时将真菌从冰箱中取出，用接种针逐一挑出真菌接种在PDA培养基上，放于28℃恒温培养箱中进行暗培养。培养7-lOd后进行共生培养研究。

   2、真菌与种子共生培养 

   将发酵好的牛粪和木屑基质加入少量蒸馏水，用手握基质湿润又捏不出水即可，分装在若干培养瓶中，高温高压灭菌冷却备用。按照常规兰科种子消毒方法对金线莲茹果进行消毒，用解剖刀将茹果划开将种子抖落在灭好菌的牛粪和木屑基质中。分别在PDA培养基上截取lcmX 1cm真菌小块，放于播完种的牛粪和木屑基质中，每种真菌在2种基质中各接种3瓶。空白对照只播种不接种真菌。将接完菌和种子的培养瓶放于28℃黑暗条件下培养1周，随后培养条件为光照时间12h/d，光照强度为2000-25001x，培养温度26±2 ℃，观察种子萌发情况。