双孢菇菌种的培养

　　母种是从专门的食用菌研发中心购进的，拿到母种后首先要进行扩繁。

　　1 母种的扩繁

　　1.1 培养基的配方

　　既然要把母种进行扩繁，咱们还需要配制培养基，制作母种的培养基需要的材料有马铃薯、琼脂、口服葡萄糖和水。材料准备好了，咱们来进行培养基的制作吧。

　　1.2 培养基的制作

　　我们要选择质量较好的马铃薯将皮去掉，并挖去芽眼，然后用天平称取100克，冲洗干净切成1-2毫米的薄片，然后把切好的土豆放入锅中，加入600毫升的清水，进行加热，沸腾后要小火保持30分钟，然后用纱布进行过滤，我们留取的土豆汁为500毫升，将过滤好的土豆汁倒入锅中继续加热，这时候称取10克琼脂，把琼脂放入水中软化15分钟后把琼脂放入装有土豆汁的锅中，琼脂放入锅中要不停的搅拌，等琼脂完全融化时称取10克葡萄糖放入锅中，沸腾之后把煮好的溶液放入容器内然后就可以装试管了。

　　1.3 分装

　　制备的母种培养基要趁热尽快分装试管，把玻璃漏斗安放在滴定架上，通过乳胶管进行分装即可。使每支分装试管的装量相当于试管长度的1/4左右。分装好后还要进行封口，可以用未经脱脂的原棉，塞入的松紧度以用手抓棉塞不脱落为标准，棉塞塞入试管的部分约为2厘米左右，外露部分约占棉塞总长的1/3左右。

　　1.4 灭菌

　　制好的试管还要进行灭菌，用绳子把试管扎成捆，这样做是为了防止试管在高压锅中加热时倾倒。然后在试管上盖上一层牛皮纸，牛皮纸的作用是防止灭菌时产生的冷凝水沾湿棉塞，随后把试管放入高压锅中进行灭菌，灭菌时高压锅的压力到达0.05MPA时放气一次使压力表回归到0时使压力锅再次升压，这次压力上升到0.1MPA并维持30分钟，在这样的压力下，高压锅的温度一般在120℃左右，加热停止后等温度自然降至常温再打开高压锅，将试管取出。

　　灭菌后的试管都要趁热放置在摆斜面的专用木框内，底端最好支一小木块让试管保持倾斜，一般情况下，要将倾斜度保持在20度，以培养基占试管的2/3为标准，最好在斜面上面覆盖一层棉布，以防止试管冷却过快产生太多的冷凝水，大约半个小时以后，由于琼脂的凝固作用，试管中的培养基就凝固了，这样母种培养基就做好了。

　　1.5 母种接种

　　接下来要做的工作就是接种了。接种要在无菌操作室或无菌室的超净工作台上进行。接种前，我们要把培养基和操作时使用的工具放入接种箱内然后放入66%氯异氰尿酸钠烟剂，并将其点燃，使用药量为每立方米3.96-5.78克。接着要关好无菌箱，以进行环境消毒的工作，大约30分钟以后，待无菌箱内的烟雾散尽之后，我们就可以接种了。接种时，手和接种针要用75%的酒精棉球擦洗，之后，点燃酒精灯，使火焰周围空间形成无菌区，用酒精棉球把母种试管进行消毒处理，架在试管架上。接种针和镊子要在火焰上进行灼烧灭菌，接下来，把接种用的试管用酒精棉球擦拭消毒并把瓶口的棉塞取下来，把试管口在火焰上稍微烤一下，以杀灭管口的杂菌，随后将试管口移到距离母种试管口1-2厘米处，用接种针将母种切成一个小方块，每块的面积大约为0.5平方厘米，并取一块迅速放入被接种的试管斜面的中前部，然后，再烤一下棉塞，并迅速塞上棉塞，接下来，按照同样的方法连续操作就可以了，一般情况下，每支母种可以扩接试管30-40支。接种完成以后，还要进行培养。

　　1.6 母种培养

　　我们将接好种的试管放入恒温培养箱中进行母种的培养，温度应该控制在24℃-26℃，培养一个星期后就可以萌发菌丝了，这时，我们就可以用它来进行原种的接种了。当然原种在接种之前也要先进行培养基的制作。

　　2 原种的扩繁

　　2.1 培养基的配方

　　原种的培养基我们使用的材料有麦粒、发酵牛粪和碳酸钙，如果按50千克麦粒计算的话，需要发酵牛粪4千克，活性轻质碳酸钙1千克，材料准备好了，咱们先把麦粒用水冲洗干净，然后放到锅里煮，将麦粒煮30分钟，麦粒没有煮破皮然后用手掐一下，麦粒没有白心，麦粒就煮好了。把煮好的麦粒晾至七八成干然后放入发酵的干牛粪和碳酸钙用手混合均匀就可以进行装瓶了。

　　2.2 装瓶及灭菌

　　通常，我们都是采用人工装瓶的，将培养基直接装入普通的盐水瓶就可以了，需要注意的是，瓶子不要装的太满，在瓶口处要留出大约5厘米的高度，瓶子装好之后，还要进行封口，这些工作都完成以后，我们就可以将培养瓶转移到高压锅里，进行高压灭菌处理了，培养瓶摆放好以后，要将高压锅完全封闭，然后，再开始加热，加热要进行2-3个小时，灭菌时的压力为0.13-0.15MPA，温度为120-127℃。加热完成后，不要马上打开压力锅，要等待30分钟左右，待锅里的菌种瓶完全冷却后，再将高压锅盖打开，接着，就可以将菌种瓶取出，准备接种了。

　　2.3 接种

　　原种接种工作也要在无菌超净工作台上进行，操作前的消毒工作和母种接种时是一样的，这一系列工作都做完后，我们从试管母种中挑取1-1.5厘米见方的一小块菌种块，轻轻放入原种瓶中，并及时塞上棉球。在这里我们再注意一点，接种时的母种瓶口要对着酒精灯的火焰，可以起到防止其他杂菌侵入的作用。一般情况下，一支母种试管，可以接6-8瓶原种。接种完成以后，我们就可以将原种瓶放到培养室中了。

　　2.4 原种培养

　　我们将菌瓶直接摆放到培养架上就可以了，菌种培养期间，室内的温度要保持在25℃左右，湿度保持在75%-80%，这样的温湿度下菌丝的生长速度是最快的，一般10天以后就开始发菌丝。原种培养时间较长，一般为40天左右。可能观众朋友们有疑问了，在这期间有什么管理呢，通常，在原种培养时只要掌握好室内的温度，保证室内光线阴暗就可以了。另外，每天还要适时地通风换气，每天换气的次数为两次，早晚各一次，时间要掌握在1个小时内。大约40天以后，菌丝就可以长满菌瓶了，这时我们就可以进行下面的工作了，用原种来扩繁栽培种。

　　3 栽培种的扩繁

　　3.1 培养基的配方及制作

　　栽培种培养基的配方与原种又有区别，它的材料主要有棉籽壳、发酵干牛粪、活性轻质碳酸钙、过磷酸钙。如果使用50千克棉籽壳的话需要发酵干牛粪5千克，活性轻质碳酸钙1千克、过磷酸钙0.5千克，把这些原料用水混合均匀水分的含量保持30%左右就可以使用进行装袋了。

　　3.2 装袋及灭菌

　　因为栽培种制作的数量较多，所以我们使用塑料袋对栽培种进行扩繁，咱们采用人工的方法进行装袋，把培养基装到袋子里，装的时候注意用手压实，然后将塑料环直接套在袋口上，盖上瓶盖。这些工作完成之后，把装好培养基的菌袋运到高压锅前进行灭菌工作，灭菌时的压力为0.15MPA保持高压锅内的温度在120℃左右，灭菌进行两个小时。接下来我们把原种接到栽培袋中。

　　3.3 接种

　　接种前的消毒工作和前面是同样的流程，这些工作完成后，把距离瓶口1/3的菌种去掉，这部分菌种被称为菌皮，不适合接种，然后把瓶内的菌种打散，把栽培袋的瓶盖取下来使用接种钩从原种瓶内勾取原种轻轻的放进栽培种的菌袋内，接种的量为10克左右就可以了，并及时将栽培袋的瓶盖拧紧。通常每500毫升的菌种瓶可以接种45-50袋栽培袋，接种工作完成后我们还要把栽培种放到培养室中进行菌丝的培养。

　　3.4 栽培种培养

　　我们把菌袋直接摆放到栽培架上就可以了，菌种培养大约需要40-50天时间，在这段时间内我们要注意培养室内温湿度的控制，注意培养室内的温度保持在20-24℃，湿度控制在50%-60%，调节室内的温湿度咱们可以通过室内控温设施来进行。除此之外工作人员还要经常对培养室内的菌种进行检查，将发霉变质的菌袋及时挑出来进行清除以免感染其他的菌袋。当菌丝长满菌袋时我们就可以播种了。